会计学WesternBlot基本原理一、实验原理(yuánlǐ)WesternBlot法又称免疫印迹法（IBT），分三个阶段进行。第一阶段：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）。第二阶段：电转移。第三阶段：固相酶免疫测定。/三、固相酶免疫测定检测ENA自身(zìshēn)抗体（一）原理(yuánlǐ)（二）材料1、洗涤液：含0.05％吐温-20的pH7.4的PBS2、酶标抗人IgG3、阴性对照血清、阳性对照血清4、底物(dǐwù)溶液5、终止液6、恒温摇床、微量加样器、反应槽、塑料袋、滴管、吸管等。（三）方法1．次日取出已封闭的NC膜，用洗涤液漂洗5次，每次1min。2.将剪下条带放入反应槽中，加入1ml洗涤液，再已加入20μl血清混匀，37℃恒温摇动40min。3．取出洗涤液漂洗5次，每次1min。4．加入1ml酶标羊抗人IgG，37℃恒温摇动30min。5．取出洗涤液漂洗5次，每次1min。6．加入底物液1ml，显色(xiǎnsè)10min。7．加入终止液终止反应。/结果判断(pànduàn)用肉眼观察。出现染色条带为阳性，不出现染色条带为阴性，不同的疾病可以出现不同的条带。跟据条带位置判断(pànduàn)结果。判断(pànduàn)标准：1．抗Sm抗体：同时出现29KD、28KD、13.5KD条带。2．抗SSA抗体：60KD、52KD任意出现一条带。3．抗SSB抗体：47KD、45KD应用时出现条带。4．抗Jo-1抗体：55KD出现条带。5．抗Scl-70抗体：同时出现86KD、67KD条带。