会计学/二、试剂1、绵羊红细胞（SRBC）：无菌采静脉血，除去纤维蛋白后，洗涤配成2%浓度应用(yìngyòng)。2、溶血素：抗绵羊红细胞抗体，需提纯后灭活补体。用稀释缓冲液稀释至2单位。3、稀释缓冲液：PH7.4巴比妥缓冲液三、方法1、待检标本的处理：取试管一支加待测血清0.20ml，加入3.80mlpH7.4巴比妥缓冲液，使血清为1：20稀释。2、取1列10支试管，从1~10编号，第1~9为测定管，第10管为对照管。按表进行(jìnxíng)加样。3、50%溶血标准管全溶管：2%SRBC1ml+4ml蒸馏水混匀静置10min50%溶血管：2ml全溶管液体+2mlpH7.4巴比妥缓冲液。4、上述所有试管经2500rpm，离心5min后，与50%溶血管肉眼初步比较，取较接近的2管进行(jìnxíng)比色，确定最接近50%溶血管的管号。四、结果判断：根据(gēnjù)最接近50%溶血管的管号，查出该管所加待检血清标本量，按下列公式计算：CH50（U/ml）=1/50%溶血管的血清用量（ml）×稀释倍数正常范围：50~100U/ml一、原理Ag和相应Ab反应所形成的免疫复合物（IC）能吸附（固定）并激活补体。5种成份分属于：⑴反应系统；⑵补体系统；⑶指示(zhǐshì)系统。反应、指示(zhǐshì)系统竞争结合补体系统。先加入反应系统，优先结合补体。若反应系统中待测的Ab（或Ag）与已知Ag（或Ab）相对应，则Ag与Ab形成IC后可结合补体；再加入指示(zhǐshì)系统时，因已没有游离的补体而不出现溶血，为补体结合试验阳性。若不相对应，将会有游离的补体参与指示(zhǐshì)系统的反应，最终会出现溶血现象，为阴性。补体结合试验(shìyàn)图示二、试剂1、受检抗原、抗血清（56℃30min灭活，1:50稀释）。2、补体(bǔtǐ)（豚鼠新鲜血清，2u）、1%绵羊红细胞（SRBC）、溶血素（2u）。3、生理盐水、试管、吸管、水浴箱等。三、方法1、溶血素效价的滴定按照(ànzhào)下表操作以显示全溶的溶血素最高稀释度作为溶血素的效价。在补体结合试验时，溶血素的效价也称之为1个溶血素单位，在正式试验时一般采用2个溶血素单位。管溶血素││2单位│pH7.4巴│2％羊│号稀释(xīshì)度│溶血素│补体│比妥缓冲│红细胞│假定结果────┼───┼───┼────┼───┼────11:300│0.25│0.15│0.85│0.25│放│全溶21:400│0.25│0.15│0.85│0.25│置│全溶31:500│0.25│0.15│0.85│0.25│37│全溶41:600│0.25│0.15│0.85│0.25│℃│全溶51:800│0.25│0.15│0.85│0.25│水│全溶61:1000│0.25│0.15│0.85│0.25│浴│全溶71:1200│0.25│0.15│0.85│0.25│30│全溶81:1600│0.25│0.15│0.85│0.25│分│微溶91:2000│0.25│0.15│0.85│0.25│钟│微溶101:2400│0.25│0.15│0.85│0.25││不溶111:3200│0.25│0.15│0.85│0.25││不溶121:4000│0.25│0.15│0.85│0.25││不溶131:4800│0.25│0.15│0.85│0.25││不溶141:6400│0.25│0.15│0.85│0.25││不溶2、补体滴定：一般用豚鼠补体，每次试验前均应滴定按照下表操作(cāozuò)以能产生完全溶血的最少量的补体为1个“恰定单位”，全溶第2管为1个“实用单位”。正式试验时使用2个实用单位。补体效价滴定注①:为了排除抗原或抗体的抗补体作用，需在补体滴定的同时(tóngshí)加入抗原或抗体（如待检系统中以抗原测定未知抗体，需加入抗原，反之则加抗体）。注②:指稀释好的每2单位溶血素与等量2％绵羊红细胞悬液混合，置室温作用20～30分钟即可。效价计算：从上表可以看出：0.06ml1:60稀释的补体为1个“恰定单位”，0.08ml为1个“实用(shíyòng)单位”。补体结合试验用2个“实用(shíyòng)单位”，则0.16ml1:60稀释补体相当于2个“实用(shíyòng)单位”。由于正式试验时所加入的补体量为0.2ml，因此需按下公式算出所用补体的稀释倍数。0.08×2：60＝0.2：X60×0.2X＝─────＝750.08×2即将豚鼠血清用pH7.4巴比妥缓冲液作1:75稀释后，每0.2ml中含2个实用(shíyòng)单位的补体。3、抗原和抗体的滴定：一般(yībān)