实验八植物茎尖离体培养（选做）【目的】通过采用多个不同植物材料进行微茎尖培养实验，增强学生将所学植物茎尖培养脱毒技术应用于生产的能力。【要求】掌握无菌条件下进行显微操作技术；植物茎尖培养脱毒技术。学会植物茎尖培养脱毒的基本方法；掌握植物茎尖培养脱毒的一般程序；了解植物病毒脱除的主要鉴定方法（指示植物法和酶连免疫吸附测定法）。【内容】1、外植体灭菌2、接种3、离体培养与继代【用具】超净工作台、放大镜；不锈钢镊子、解剖针、解剖刀、酒精灯等。【药品】①按照培养基要求准备药品；②材料表面消毒剂：70%乙醇和0.1%HgCl2；③无菌水。【实验材料】带病毒的马铃薯块茎、烟草或草莓等材料。【方法】(1)在正常的温度和光照条件下，在土中种一块单芽眼块茎，当芽长到约15cm高时，将顶捎切下6～8cm长，去掉下面的2片叶，在切口处涂上生根激素，植入一个内装消毒土壤的花盆中，然后用玻璃烧杯罩上，保持10d后将烧杯拿掉。(2)植入花盆３～４周后，将其移入生长箱中，其中光强：3000～4000lx，16h/d，气温白天约为36℃，夜间约为33℃，以通过热处理杀灭病毒。(3)两周后打掉幼株的茎尖，以促使腋芽的生长。(4)经过６周的热处理后，折下一个腋生枝，从其上取芽，在植株上至少留2个叶片以促其进一步生长。由折下的腋生枝上剪去叶片，但要把一小段基部叶柄留在枝上，把这个腋生枝包在湿纸内以防枯萎。以下各项均须在无菌条件下进行。(5)在体视显微镜（50×）下，把茎尖解剖出来（枝条一般不必消毒或只做简单的表面消毒）。剥取茎尖的方法：把茎芽置于解剖镜下，一只手用细镊子将其按住，另一只手用解剖针把残留的叶柄向后拉，使芽暴露出来，再将叶片和叶原基剥掉，当只剩下2个最幼小的叶原基时，用锋利的解剖刀切下茎尖（0.3～0.5mm长）直立向上接种到固体培养基上或管内加有培养液的纸桥上。（马铃薯茎尖培养培养基：MS+KT0.04+IAA0.5+GA30.1+20g蔗糖+（5.5g琼脂），PH5.6MS+BA0.5+NAA0.1+GA30.2+20g蔗糖+（5.5g琼脂），pH5.8）接种过程中解剖针要常常蘸入95％酒精，并用火焰灼烧消毒。但要注意解剖针的冷却，可蘸入无菌水进行冷却。接种时确保微茎尖不与其它物体接触，只用解剖针接种即可。这项操作必须迅速，以免超净台的气流风干茎尖。(6)培养条件：温度23℃，16h/d，光强1000~2000Lx。由于在低温和短日照下，茎尖有可能进入休眠，所以较高的温度和充足的日照时间必须保证。微茎尖需数月培养才能成功。有些马铃薯品种经1～2周培养后，茎尖即开始变绿、伸长、基部变粗，一个月后，茎伸长明显，原来的叶原基发育成小叶片，这时若把它们转入生根培养基，就会逐渐长出根系，最后形成完整的小植株。(7)茎尖培养的继代培养和生根培养和一般器官的培养相同。当茎长到3cm或更长并生根后即可移入土壤。起初要把植株保持在高湿度的环境中。若有些植物很难生根，可把它们嫁接到无病的砧木上。【作业】1、植物茎尖脱毒原理？2、茎尖接种应注意哪些问题？3、以菊花或马铃薯为例简述培养脱毒方法步骤？