中国水产科学2012年3月，19(2)：202-210研究论文DoI：10．3724／SP．J．1118．2012．00202应用SSR和SRAP标记构建青虾遗传连锁图谱乔慧1,2吴滟2，傅洪拓1,2龚永生2蒋速飞2熊贻伟21．南京农业大学渔业学院，江苏无锡214081；2．中国水产科学研究院淡水渔业研究中心，淡水渔业和种质资源利用重点实验室，江苏无锡214081摘要：采用SSR和SRAP标记结合拟测交策略构建青虾(Macrobrachiumnipponense)遗传连锁图谱。共有175个标记f含27个SSR、148个SRAP标记)分布在53个连锁群上。每个连锁群含2-8个标记，其中不少于3个标记的连锁群有35个，连锁对18个，平均每个连锁群的标记数为3_3个；连锁群长度在6．7-91．2cM之间，相邻标记间最大间隔为49．0cM，最小为1．4cM，平均间隔为13．1cM。青虾框架图谱长度为997．2cM，图谱观察总长度为2270．5cM，根据估算，青虾遗传连锁图谱预期长度为4380．6eM，图谱的覆盖率为51．83％。本研究构建了青虾遗传连锁图谱，该图谱也是淡水虾蟹类第一张遗传连锁图谱，可为青虾QTL定位、基因克隆、遗传选育等提供指导，并为进一步构建高密度的青虾遗传连锁图谱奠定了基础。关键词：青虾；日本沼虾；SSR；SRAP；遗传连锁图谱中图分类号：$96文献标志码：A文章编号：1005—8737一(2012)01—0202—09遗传连锁图谱构建是遗传学研究的一个重要青虾(Macrobrachiumnipponense)学名日本领域，它为进一步认识基因组组成、克隆染色体沼虾，是中国重要的淡水养殖虾种类，随着累代的基因及定位重要经济性状的主效基因奠定了基养殖规模的扩大，养殖过程中普遍出现品种退化础，也是实现分子标记辅助育种(markerassisted现象，因此必须加强青虾的遗传改良与良种选selection，MAS)的重要手段。目前，已有多种重要育。有关青虾群体遗传多样性分析及性状相关分经济鱼类和贝类构建了遗传连锁图谱，包括鲤子标记初步筛选等已有报道[12-15]，但其遗传连锁(Cyprinuscarpio)、虹鳟(Oncorhynchusmykiss)、图谱构建迄今未见报道。本研究采用微卫星标记罗非鱼(Oreochromisspp．1、太平洋牡蛎(Crassostrea(simplesequencerepeat，SSR)和相关序列扩增多gigas)、贻(Mytilusedulis)等[卜，其中虹鳟【、罗态性标记(sequence—relatedamplifiedpolymor—非鱼[3]等已构建第二代图谱，可满足进一步QTLphism，SRAP)结合拟测交策略构建青虾遗传连精细定位的需要。虾蟹类方面，已报道了中国对锁图谱，旨在为青虾高密度遗传连锁图谱的构建奠虾(Penaeuschinensis)J、日本对虾(Penaeusja—定基础，并为分子标记辅助育种工作提供参考。ponicus)t引、凡纳滨对虾(Penaeuslitopenaeus1材料与方法v口nm口nici)t、斑节对虾(Penaeusmonodon)[。和三疣梭子蟹(Portunustrituberculatus)口等的遗传连1．1作图群体锁图谱，但密度均较低，而淡水虾蟹类遗传图谱试验用青虾的亲本均来自野生种群，捕获后构建还未见报道。经单独驯养用于实验，其中父本采自珠江河口段，收稿日期：2011-08—08；修订日期：2011-10—26．基金项目：江苏省高技术研究项目(BG2007328)；中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金资助项目(2011JBFA02)作者简介：乔慧(1981一)，女，博士，主要从事水产动物遗传育种研究．E-mail：qh1212000@126．com通信作者：傅洪拓，研究员，博士生导师．E—mail：fuht@frc．cn第2期乔慧等：应用SSR和SRAP标记构建青虾遗传连锁图谱203母本采自太湖无锡湖区。在实验室饲养至性成熟列均由GenBank下载，登录号分别为GU078555一后，于2009年5月挑选性腺发育良好、身型较大GU078569，GU586071一GU586097，EU130924-的雌雄青虾完成5组一对一杂交试验，构建家系。EU130935，GQ257616一GQ257566。采用primer5于2009年10月随机取其中的一组64个F1青虾设计引物，并对引物进行反应条件优化。共设计个体作为作图群体，子代中雌雄比例为35：29。样得到96对引物，首先在亲本和4个子代中扩增，本储存于无水乙醇中，一20~C