备课用纸食品微生物实验备课笔记吴君艳江苏食品职业技术学院2012年8月实验一普通的光学显微镜的构造和使用（2课时）一、目的要求1、了解显微镜的构造、性能及原理2、掌握显微镜的基本使用技术和保养方法3、掌握显微镜（油浸镜）观察、识别细菌基本形态的方法二、实验器材菌种：霉菌标片、大肠杆菌染色标本片、金黄色葡萄球菌标本片试剂：香柏油、二甲苯仪器及其他：显微镜、擦镜纸三、方法与步骤1、低倍镜观察先将低倍物镜的位置固定好，然后放置标本片，调好光线，将物镜提高，向下调至看到标本，再用细调对准焦距进行观察。2、高倍镜观察显微镜的设计一般是共焦点的。低倍镜对准焦点后，转换到高倍镜基本上也对准焦点，只要稍微转动微调即可。3、油浸镜观察油浸物镜的工作距离（指物镜前透镜的表面到被检物体之间的距离）很短，一般在0.2mm以内，因此使用油浸物镜时要特别细心，避免由于“调焦”不慎而压碎标本片并使物镜受损。使用油镜按下列步骤操作：（1）先用粗调节旋钮将镜筒提升（或将载物台下降）约2cm，并将高倍镜转出。（2）在玻片标本的镜检部位滴上一滴香柏油。（3）从侧面注视，用粗调节旋钮将载物台缓缓地上升，使油浸物镜浸入香柏油中，使镜头几乎与标本接触。（4）从接目镜内观察，放大视场光阑及聚光镜上的虹彩光圈，使光线充分照明。用粗调节旋钮将载物台徐徐下降，当出现物像一闪后改用细调节旋钮调至最清晰为止。如油镜已离开油面而仍未见到物象，必须再从侧面观察，重复上述操作。（5）观察完毕，下降载物台，将油镜头转出，先用擦镜纸擦去镜头上的油，再用擦镜纸蘸少许二甲苯，擦去镜头上残留油迹，最后再用擦镜纸擦拭2—3下即可，（注意向一个方向擦拭）。4、结束后，将显微镜各处擦拭干净，套上镜罩后方可离开。四绘图说明根霉菌标准片中观察到的细菌的形态特征。五、思考题1、油镜完毕后，镜头应如何处理?2、什么叫工作距离？实验二酵母菌的形态观察及死活细胞的鉴定（2课时）实验目的进一步熟练掌握显微镜的使用技术，通过高倍镜观察了解酵母菌的形态结构。掌握鉴别酵母菌细胞死活的染色方法。二、实验器材菌种：酵母菌标准片，酵母菌菌悬液。染色液或试剂：革兰氏染色用碘液，0.1％吕氏碱性美兰染色液仪器和其他：显微镜、载玻片，盖玻片、镊子三、方法与步骤酵母细胞的形态观察（1）酵母菌水-碘液浸片的制作：取一洁净的载玻片，用滴管取一小滴革兰氏染色用碘液，将其滴于载波片中央，然后滴加酵母菌悬液放入其中混匀，盖上盖玻片，小心将其一端与菌液接触，然后缓慢放下，避免产生气泡。（2）镜检：先用低倍镜观察，再用高倍镜观察。用同样的方法观察其他酵母菌标本片。观察是注意酵母菌细胞的形状和出芽情况。死活酵母细胞的染色鉴别取美兰染色液一滴，滴在载玻片中央，再加一滴酵母菌悬液，混合均匀，染色3～5min后加盖玻片镜检。未被染色的是活细胞，被染成蓝色的是死细胞。四、绘图说明所观察到的酵母菌的形态特征。五、思考题1、如何鉴别死活酵母菌？实验三酵母菌细胞数的测定（2课时）一、目的要求：了解血球计数板测定微生物数量的原理。了解血球计数板的结构，学习并掌握利用血球计数板进行酵母菌记数的方法，包括样品的点样、菌数计数的方法与计算。二、实验原理微生物常用的计数方法有两种，即直接计数法和间接计数法。前者利用血球计数板在显微镜下直接计数，能立即得到数值。后者是在平板上长成菌落后再计数，反应较真实，但费时太长。三、实验器材菌种酵母菌液仪器显微镜，血球计数板、盖玻片（22mm×22mm）、吸水纸、计数器、滴管、擦镜纸等四、操作方法酵母细胞数的测定操作方法1.血球计数板的构造血球计数板是由一块比普通载玻片厚的特制玻片制成的。玻片中有四条下凹的槽，构成三个平台。中间的平台较宽，其中间又被一短横槽隔为两半，每半边上面个刻有一个方格网。方格网上刻有9个大方格，其中只有中间的一个大方格为计数室，供微生物计数用。计数室通常有两种规格。一种是大方格内分为16中格，每一中格又分为25小格；另一种是大方格内分为25中格，每一中格又分为16小格。（本实验用）2、酵母菌菌数量的测定(1)取洁净的血球计数板一块，在计数室上盖上一块盖玻片。(2)将酵母菌液摇匀，用滴管吸取少许，从计数板中间平台两侧的沟槽内沿盖玻片的下边缘滴入一小滴(不宜过多)，使菌液沿两玻片间自行渗入计数室，勿使产生气泡，并用吸水纸吸去沟槽中流出的多余菌液。也可以将菌液直接滴加在计数室上，然后加盖盖玻片(勿使产生气泡)。(3)静置约5分钟，先在低倍镜下找到计数室后，再转换高倍镜观察计数。(4)计数时用16中格的计数板，要按对角线方位，