常用实验动物的了解和解剖器械的使用一、常用实验动物细胞生物学实验中，除应用培养细胞外，最常用的动物是蟾蜍和小白鼠，下面对其特点及基本处置做一简单的介绍。蟾蜍蟾蜍是两栖类动物，由于其取材方便，常用于各种实验。其细胞较哺乳类动物的细胞大得多，因此常用于观察细胞形态的实验。1．雌雄鉴别通常雄性蟾蜍较雌性的为小，且在其前肢的l～3趾基部有被称为婚垫的黑疣。2．捉拿及处死方法常用捣髓法处死蟾蜍，即用解剖针捣毁其脑组织和脊髓。具体方法是，左手握住蟾蜍的身体和四肢，使其腹部贴着掌心，食指压住蟾蜍头部前端使其尽量腹屈。在头与躯干之间可触及一凹陷(即枕骨大孔所在处)，右手持解剖针直插入此凹陷约l～2mm，随即将针尖转向头侧插入颅腔捣毁脑组织。然后将解剖针抽回并转向尾侧刺入脊椎管内捣毁其脊髓。如此直至其四肢松软，呼吸消失为止。小白鼠小白鼠是哺乳动物，是最为常用的实验动物。1．捉拿方法：将小白鼠放在鼠笼盖铁网上，用右手持其尾巴向后拉，小鼠则会尽力向前蹬。用左手的拇指和食指抓住其头顶部皮肤，然后用左手小指与手掌之间夹住其尾巴。2．处死方法：处死应以安乐死为原则，即使之无痛苦而迅速死亡。常用的方法有颈椎脱位法，断头法和二氧化碳吸入法等。断头法需用特殊的断头器，二氧化碳吸入法则将小鼠放入盛有二氧化碳的容器内即可。颈椎脱位法的具体方法是：左手拇指和食指按住小白鼠的头部，右手捉住其尾巴迅速向后猛拉，使其颈椎脱位而立即死亡。3．给药方法：小自鼠的给药途径有经口给药、腹腔内注射、尾静脉注射、皮下注射、皮内注射和肌肉注射等。我们常用的是腹腔注射。具体方法是：左手捉住小鼠(如前所述)，在其腹正中线稍外侧(避开膀胱和血管)用酒精消毒后，首先将注射针头向头部方向刺入皮下，进针1～2mm后，再以45°角刺穿腹部肌肉而进入腹腔(刺穿腹肌时有一落空感)。针头刺入腹腔后切勿左右摆动，以免损伤肠管或肝脏。注意每次注入的液体量应为0.1～0.2ml／10克体重。二、显微镜的使用方法显微镜在使用前，应先检查一下它的各个部件是否完整和正常，并进行必要的清洁工作，然后将显微镜放置在自己左肩前方的实验台上，离桌子边缘3—6cm为宜，以便观察。(一)低倍镜的使用方法1．对光2．放置玻片标本3．调节焦距(二)高倍镜的使用方法1.一定要先在低倍镜下找到要观察的标本物像后，再把需要放大的部分移至视野正中，并把物像调节到最清晰的程度。2．转动物镜转换器(三)油镜的使用方法1.在高倍镜下找到所要观察的标本移至视野中心。2.把集光器上升到最高位置，光阑开到最大。3.移开高倍镜，在要观察的部位的盖玻片上滴加一滴香柏油作为介质。4．稍稍上升镜筒或下降载物台，使油镜对准通光孔，慢慢转动粗调螺旋，使油镜与油滴接触，再小心地使它贴近盖玻片表面。5．用眼观察目镜，微微上升或下降载物台，直到出现清晰的物像。6．油镜使用完毕，先用拭镜纸蘸少许二甲苯将镜头上的大部分油去掉，再用干拭镜纸擦拭。擦拭时要顺镜头的直径方向，不要沿镜头的圆周擦。1.DNA的原位显示—Feulgen染色法『目的要求』1、掌握Feulgen反应的基本原理2、掌握Feulgen反应操作全过程。3、熟悉细胞化学技术『实验用品』光学显微镜、恒温水浴锅、染色缸、小烧杯、滴管、载玻片、Schiff试剂、1N的HCL溶液、3%的亚硫酸氢钠溶液，4.5%的醋酸、洋葱根尖『实验原理』DNA经弱酸（1N的HCL）水解，其上的嘌呤碱和脱氧核糖之间的键打开，使脱氧核糖的一端形成游离的醛基，这些醛基在原位与Schiff试剂（无色品红亚硫酸溶液）反应，形成紫红色的化合物，使细胞内含有DNA的部位呈紫红色阳性反应。紫红色的产生是因为反应产物的分子内含有醌基，醌基是一个发色团，所以具有颜色。。『实验内容和方法』（一）Feulgen反应的一般步骤：1、取一小段洋葱根尖于小烧杯中，用1N盐酸60℃水浴中水解8min。2、去盐酸，用蒸馏水漂洗片刻。3、Schiff液染色30min。4、用新配制的亚硫酸氢钠溶液洗3次，每次约5min5、用自来水洗5min。6、滴一滴4.5%醋酸于载玻片，将根尖放于载玻片的醋酸中，加盖玻片，轻压。7、镜检：细胞内DNA的部位呈紫红色。8、绘图2.细胞膜的通透性目的要求：观察细胞膜的通透性及各类物质进入细胞的速度了解膜通透性的一般规律实验原理细胞膜是一种半透膜，对物质的通透具有选择性。将红细胞放在低渗溶液中，水分子会大量渗到细胞内，使细胞胀破，血红蛋白释放到介质中，这种现象称为溶血。将红细胞放入含有不同溶质的等渗溶液中，由于细胞膜对各种溶质的透性不同，有的溶质可以渗入，有的溶质则不能渗入，渗入的溶质能够提高红细胞的渗透压，所以促进水分进入细胞，随着