中华人民共和国国家标准水果、蔬菜汁游离氨基酸含量的测定GB/T12292-90Juiceoffruitsandvegetables—Determinationoffreeaminoacid───────────────────────────────────────1主题内容与适用范围本标准规定了水果、蔬菜汁中游离氨基酸的提取净化及测定方法。2测定原理水果、蔬菜汁通过阳离子交换树脂,固定及净化氨基酸。用2mol/L氢氧化铵把氨基酸洗脱后,脱氨浓缩。用氨基酸分析仪测定含量。3仪器设备3.1氨基酸分析仪或高压液相色谱仪；3.2玻璃柱,高20cm,内径2cm；3.3捣碎机；3.4离心机；3.5天平；3.6旋转蒸发器。3.7真空干燥器。4试剂全部试剂均为分析纯,配制试剂均用去离子水。4.1阳离子交换树脂,Dowex50W×4型,100～200目,或其他适宜的树脂。4.2盐酸溶液6mol/L,0.1mol/L。4.3氢氧化铵溶液2mol/L。4.4氢氧化钠溶液3.5mol/L。4.5每种氨基酸标准溶液0.0025M。4.6仪器分析用的各种缓冲液。4.7仪器分析用的茚三酮试剂。5试样选取和制备5.1液体产品需充分混匀。5.2固体产品选取有代表性的水果和蔬菜洗净,擦干,剥去或削去果皮,用四分法取样150g左右。5.3称样称取样品100～150g,准确至0.01g,置于捣碎器的玻璃缸内,加入等量的水。5.4样品捣碎将盛样品的玻璃缸装在捣碎机上,在1档速度捣碎1min,取出倒入烧杯中。5.5过滤及离心把已捣碎的样液过滤,吸取10mL滤液放入离心管中,在4000r/min的转速下离心15min。5.6脱果胶对含果胶丰富的样液需用乙醇处理,准确吸取样液5mL,加入34mL96％乙醇,过滤,用15mL80％乙醇分三次冲洗滤纸,将滤液在35℃下减压蒸馏。6分析步骤6.1固定柱的装置将Dowex50W×4树脂装入玻璃圆柱中,离上端空出约10cm,用6mol/L盐酸250mL活化树脂,然后用水洗至无氯离子为止（用硝酸银检查,不产生白色沉淀）。调节活塞,使溶液流速为1mL/min。6.2固定及洗脱吸取5mL样液或液体产品,除果胶物的样液则取全部,置玻璃圆柱中,再加5mL水,待液体通过树脂后再加2mol/L氢氧化铵50mL,可分3～4次加完,用50mL水洗涤,将加2mol/L氢氧化铵流出的溶液收集在圆底烧瓶内,在减压真空和加热(40～45℃)条件下蒸发至干,用5mL0.1mol/L盐酸溶解。6.3脱氨吸取待测液1mL,加入3.5mol/L氢氧化钠溶液2～3滴,调至pH10～11,放在真空干燥器中减压蒸干。用1mL水洗涤,再抽真空蒸干。这样重复2次,加入pH2.2缓冲液0.5mL和0.1mol/L盐酸0.5mL,使pH达到2.2,再稀释5～10倍后测定。6.4测定用氨基酸分析仪测定氨基酸含量,测定前需做2～3个氨基酸标样,待仪器稳定后再测试样。7结果计算7.1结果表示用mg/kg或mg/L。7.2计算公式NG某个氨基酸含量(mg/kg)＝──×10**(-3)×dmNG某个氨基酸含量(mg/L)＝──×10**(-3)×dmL式中：NG——从仪器测得的某个氨基酸的质量,Ng；m——新鲜样品重,g；mL——原始取样体积,mL；d——稀释倍数。7.3允许差水果、蔬菜汁游离氨基酸平行测定的结果,相对相差不得大于5％。──────────-附加说明：本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由中国农业科学院分析测试中心负责起草。本标准由上海农科院分析中心参加起草。本标准主要起草人李伟格、顾金炎、陈必芳。本标准参照采用NFV76--1151983《水果蔬菜汁中游离氨基酸的测定》。───────────────────────────────────────国家技术监督局1990-03-29批准1990-12-01实施