液相色谱法Liquidchromatography(LC)主要内容：色谱法的产生和发展、分类和特点液相色谱的基本原理和分类液相色谱的结构和工作原理ShimadzuLC-20A使用说明1.色谱法的产生与发展最早创建色谱分离方法的是俄国植物学家茨维特（Tswett）。1903年他把植物的石油醚提取液倒入装有碳酸钙固体小颗粒的玻璃管中，然后用纯净的石油醚淋洗。经过一段时间后，在柱管上形成不同颜色的色带，茨维特称之为“色谱”，进而将这种分离技术称为色谱法。通过萃取各个色带中的组分，分离得到浸取液中叶绿素和其它色素。后来，用色谱分析的物质已极少为有色物质，但色谱一词仍沿用至今。利用色谱分离技术，再结合适当的检测手段，对多组分混合物进行分析测定的方法叫色谱分析法。将上述实验中盛装碳酸钙固体颗粒的玻璃管叫色谱柱（column），碳酸钙固体颗粒称为固定相（stationaryphase），淋洗用的石油醚叫流动相（mobilephase）。后来在色谱的发展史上，1940～1943年蒂西利斯（TiseliusA.W.K）在吸附色谱和电泳方面的贡献；1941年马丁（MartinA.J.P）及辛格（SyngeR.L.M）在分配色谱方面的贡献，使他们分别在1948年和1952年获得诺贝尔化学奖。特别是马丁等人的工作，不仅建立了色谱塔板理论，创立了液—液分配色谱，而且对色谱法的发展作出了杰出的预言，导致20世纪50年代初气相色谱法及60年代末高效液相色谱法的产生，从而使色谱法成为分析化学的重要分支。20世纪80年代以来，超临界流体色谱法和毛细管电泳法的发展，又为气相色谱和高效液相色谱难以分离检测的复杂化合物和生物大分子的分离与检测提供了新手段。色谱法分类气固色谱（GSC）：固定相为固体吸附剂。液固色谱（LSC）：固定相为固体吸附剂。超临界流体色谱（SFC）固定相为液体（涂布在担体或毛细管壁上）。色谱法按分离机理分类3．离子交换色谱（ionexchangechromatography，IEC）利用不同组分与离子交换剂的交换能力大小不同而达到分离的方法。近年来，又有一种新分离技术，它是利用不同组分与固定相（固定化分子）的高专属性亲和力不同而进行分离的技术，称为亲和色谱（affinitychromatography，AC），常用于蛋白质的分离。色谱法按固定相的形状分类2．平面色谱（planarchromatography）又称平床色谱（flatbedchromatography）。按平板色谱材料不同可分为：将固定相涂铺在玻璃板、铝箔板或塑料板等上的薄层色谱（thinlayerchromatography）；将含水滤纸作固定相的纸色谱（paperchromatography）。色谱分离过程及原理色谱法特点色谱法的缺点是定性能力差。色谱峰不能直接给出定性的结果，需有已知的纯物质作对照，才能确定色谱峰代表何种物质。近年来，色谱——红外光谱、色谱——质谱、色谱——核磁共振谱等联用技术的发展，使得分离、定性和结构鉴定可以同时实现。它是目前色谱分析技术重要的发展方向之一。随着分离要求的不断提高，现已发展了多维色谱技术。这种技术不仅是通常含义的色谱法的多根性能不同的色谱柱的联用，如双柱或多柱气相色谱之间及高效液相色谱与气相色谱联用；而且还包括广义的不同色谱法间的联用，如高效液相色谱与毛细管电泳的联用，以满足难以分离物质及复杂的多组分样品如生物样品、环境样品及天然药物成分的分离分析。2.液相色谱的原理和分类液相色谱法的分离机理是基于混合物中各组分对两相亲和力的差别。根据固定相的不同，液相色谱分为液固色谱、液液色谱和键合相色谱。应用最广的是以硅胶为填料的液固色谱和以微硅胶为基质的键合相色谱。根据固定相的形式，液相色谱法可以分为柱色谱法、纸色谱法及薄层色谱法。按吸附力可分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱和凝胶渗透色谱。1）、高效液相色谱法（HPLC）与经典液相色谱法在液相色谱系统中加上高压液流系统，使流动相在高压下快速流动，以提高分离效果，就出现了高效/高压液相色谱法；HPLC又名高速液相色谱（HSLC）、高分离度液相色谱（HRLC）等。1960年代末科克兰、哈伯、荷瓦斯、莆黑斯、里普斯克等人开发了世界上第一台高效液相色谱仪；1971年科克兰等人出版了《液相色谱的现代实践》一书，标志着高效液相色谱法(HPLC)正式建立。HPLC从原理上与经典的液相色谱没有本质的差别，它的特点是高速、高效、高灵敏度、高自动化，适于分析高沸点、分子量大、不同极性的有机化合物。HPLC配备了高压输液设备，流速最高可达10cm3·min-1。例如分离苯的羟基化合物，7个组分只需1min就可完成。对氨基酸分离，用经典色谱法，柱长约170cm，柱径0.9c