新指南CLSIEP9–A3在方法学比对及偏移评估中的应用（最全版）美国临床和实验室标准化协会(CLSI)一直致力于制定系列评价临床检验方法的文件，其在制定相关标准和指南时采用特有的协商一致过程，包括方案的建立、认可和公开，对有关文件进行广泛、细致、全面的评论，根据使用者的意见进行文件修订，以保证其适应性等[1]。CLSI在1986年1月首先推出EP9–P(proposedguideline)版本，1993年4月推出EP9–T(tentativeguideline)版本，再经过修订，1995年12月推出批准指南EP9–A(approvedguideline)版本[2]。随后，又经过3次修订，即2002年9月的EP9–A2[3]、2010年7月的EP9–A2–IR(interimrevision)和2013年8月的最新版本EP9–A3文件[4]，即《用患者样本进行方法比对及偏移评估：批准指南––第三版》，EP9–A3为生产厂家和临床实验室提供了最新的方法学比对和偏移评估指南。笔者将简要介绍其基本结构、主要用途、比对要求、实验方案、统计方法等内容，供同行参考。一、EP9–A3概述EP9–A3相比于EP9–A2[2]等以前的几个版本，其文件架构、实验方案、标本检测、统计方法、附录内容作了很大的修改。全文分为4个部分，即前言、正文、附录、参考文献。前言包括摘要、委员会成员、序；正文包括11个部分(范围、简介、防护要求、术语、方法熟悉阶段、方法比对研究、临床实验室具体要求、数据目测检查、定量分析、方法内比对、结果解释以及性能标准比较)；附录包括12个方面内容，主要为中位数评估偏移及其可信区间计算、离群值检验、回归分析方法、应用范例数据表等。二、主要用途EP9–A3主要有3个方面用途：(1)临床实验室新引进测量方法与参比方法比对；(2)厂家新建立的测量方法与参比方法相关性研究；(3)厂家对新建立的测量方法比对声明标准确认；3种用途的具体要求见表1。EP9–A3也可进行方法内比对，对于已建立或确认的方法，厂家或实验室可利用40个系列浓度标本对该方法不同条件进行比对分析，如同一方法不同样本类型、不同批号试剂等。表1EP9–A3对厂家和实验室比对研究具体要求三、比对要求1．标本要求：比对时应使用未经过处理的患者标本，分析物浓度应尽可能在测量范围内均匀分布，各标本基本信息如临床诊断或状态(是否溶血、黄疸、脂血、浑浊)均应记录。如需使用处理过的标本(如添加纯的高浓度物质)，应<比对标本总数的20%。2．数量和次数：厂家用于建立或确认声明标准，标本数量应≥100份；增加样本数将提高统计估计值的可信度。如重复测量，应计算其平均值；手工方法应重测2次。临床实验室在比对分析时，至少需40份样本，如果实验室主管认为单次测量合适，则测定1次是可接受的；如重复或多次测量，应该计算其平均值或中位数后再进行不同浓度样本间的比较。3．测定顺序：参比方法和待评方法需随机顺序测定每批标本。4．参比方法：可能的情况下，不受已知干扰物质的干扰，最好能溯源至标准物质或参考方法；具有比待评方法更低的不确定度和相同的浓度单位；线性范围应至少与待评方法范围一致。对于临床实验室，当前使用的方法，生产厂家声明的方法和公认的参考方法都可作为参比方法。实验室应清楚，除参考方法外，某些参比方法存在一定的干扰现象和基质效应。四、数据作图对待评方法和参比方法测定结果进行作图，并目测检查，初步判断选择的标本浓度是否在测定范围内均匀分布，了解方法间的差值潜在变化情况，决定后续选择何种统计方法进行更合理的评估分析。EP9–A3推荐使用偏差图和散点图。1．偏差图：(1)数值偏差图：偏差图的x轴为参比方法被测量浓度值，y轴为待评方法与参比方法的差异值，主要是观察两种测量方法间差异的分布。(2)排序偏差图：在比对试验过程中，会遇到方法间差值呈比例变化，且个别高浓度标本的变化很大，给差异评估带来难度，排序偏差图将较好的解决这个问题。偏差图的绘制规则见表2。表2偏差图绘制规则2．散点图：比对研究中，x轴为参比方法结果，y轴为待评方法结果。散点图表示因变量随自变量而变化的大致趋势，据此可以选择合适的函数对数据点进行拟合。五、偏差图和散点图潜在特征分析1．差值恒定变化(恒定SD):如果待评方法和参比方法的差值变化为恒定值，其数值偏差图和百分比偏差图见图1。图1两种测量方法恒定SD变化偏差图A图示数值偏差图；B图示百分比偏