CLSI临床质谱原则C62-A新内容解读CLSI临床质谱原则C62-A主题内容架构由基本内容某些涉及（1）范畴、（2）原则防止办法、（3）术语、（4）仪器；办法内容涉及（5）预考察事项、（6）办法建立、（7）办法验证；质控内容涉及（8）液质检查办法质量保证与质量控制、（9）后续监督构成。其中办法和质控内容是与应用过程直接有关。下面进行详细简介。5．预考察事项（preexaminationconsiderations）5.1目的分析物内容涉及5.1.1外源性物质、5.1.2内源性物质、5.1.3外源性和内源性物质有关因素、5.1.4样本采集。要充分理解目的分析物性质，包括（1）目的分析物临床意义如生理意义、临床价值、惯用检测办法等；（2）理化性质如构造式、分子量、沸点、极性大小、酸碱性等；（3）存在形式如游离型、结合型；（4）干扰因素如类似物、同分异构体、其她代谢产物等；（5）预期浓度如常量级、微量级、参照区间浓度、切点浓度、病理浓度等；（6）样本类型如血清、血浆、全血、尿样、唾液、胆汁、组织等；（7）采集和解决方式如静脉血、足底血、指尖血、离心解决或静置、何种采血管等；（8）储存和运送方式如避光、冷藏、冷冻等。5.2内标内标可以校正基质效应或者样本萃取、色谱分离、离子化过程中产生偏差，有助于提高定量分析精确性和精密度及办法稳定性。5.3试剂和耗材质量5.3.1试剂盒耗材质量：由于MS敏捷度高，因而试剂和耗材规定也高。在使用前应对试剂、耗材进行验证，避免其中杂质对MS影响。使用过程中应按照SOP进行保存、操作，避免污染。按照ISO17025:进行批间次管控。5.3.2实验室设备：配备校准品和内标时，实验室应使用A级容量瓶和移液器。6．办法建立（assaydevelopment）6.1离子转变（iontransition）在建立和优化质谱采集参数过程中，要先配制原则物质溶液直接导入质谱检测器进行质谱扫描，获取目的化合物有关信息。依照目的分析物极性选取适当离子化方式：ESI源适合中档偏大极性化合物、难挥发化合物或热不稳定化合物；APCI源适合有一定挥发性中档极性或低极性小分子化合物。依照化合物功能基团选取正负离子模式，然后选取适当离子对分别作为定量离子对和定性离子对。之后，优化化合物参数，涉及离子源参数以及质谱扫描参数，使所选取离子对质谱响应值最高。6.2高效液相色谱固定相色谱柱种类繁杂，色谱柱选取普通取决于目的分析物元素构成和化学构造。弱极性固定相有C18、C8、苯基柱等，极性固定相有氨基柱、氰基柱、硅胶柱等。要注意色谱柱耐压范畴和pH使用范畴。当更换色谱组时，应使用系统合用性样本（SSS）进行核查。6.3高效液相色谱流动相流动相设计取决于目的分析物理化性质和色谱柱特性。影响分离效果流动相参数涉及溶剂构成和比例、流速、离子强度、pH值、添加剂和温度等。其中避免使用添加剂有非挥发盐、无机盐（腐蚀离子源）、表面活性剂（抑制电喷雾）、离子对试剂（影响后续离子化）。进行梯度洗脱或等度洗脱时，要注意溶剂比例、进样量、运营时间、梯度范畴、柱温、样品溶剂等因素对分析成果影响。应明确标注流动相有效期。6.4参数考察（examinationvariables）6.4.1保存时间控制流动相、色谱柱及外部条件（如温度）等。要预混合、防蒸发、控制pH值、保证泵流速。规定每次检测保存时间变化在±2.5%内。6.4.2色谱辨别率应达到基线分离Rs>1.25。可以通过增长色谱柱长度、变化流动相构成和比例、减缓梯度、减少流速和提高柱温来实现良好色谱分离。6.4.3其她改进色谱质量因素如使用保护柱、减少死体积、检查管线连接到位等。6.4.4信噪比LLMI处S/N至少不不大于10，建议不不大于20。改进S/N办法有考察基质效应、再优化提取效率、离子源参数、洗脱梯度、重组溶液、进样体积，优化驻留时间，优化进样量，优化前解决以及考虑衍生。6.4.5色谱峰数据点和积分推荐15-20个数据点，定量项目最低不少于10个数据点进行拟合。采集数据点个数应与驻留时间关于。采用正切斜滑（tangentskim）方式积分非基线分离色谱峰。6.5误差来源6.5.1由基质效应引起生物样本高度复杂，基质构成普通涉及盐类、脂类、蛋白、多肽有机小分子等。盐类、脂类（特别是磷脂）是离子化效率最重要影响因素。多数基质干扰可以通过样品前解决或色谱分拜别除。6.5.2碎片离子交叉干扰如果两个碎片离子有相似m/z，并且同步进入碰撞室也许会发生干扰。新筛等项目需