药物的卫生检验第一节微生物检验基本知识和技术第二节药品的无菌检查第三节药品的微生物限度检查第一节微生物检验基本知识和技术第一节微生物检验基本知识和技术第一节微生物检验基本知识和技术无菌室的要求无菌室的管理洁净度的要求尘埃粒子洁净级别尘粒数/m3活微生数（个）/m3≥0.5um≥5um100级≤3,500≤0≤51000级≤350,000≤20,00≤100100000级3,500,000≤20,000≤500GB/T16294-1996沉降菌洁净级别个/（∮90mm.0.5h）100级≤110000级≤3100000级≤10菌种保存、复壮及管理菌种的保存原则菌种保存的常用方法菌种的复壮菌种的管理菌种菌液的制备（1）菌液的制备（2）菌液的制备（3）第二节药品的无菌检查表1批产品出厂最少检验数量抗生素固体原料药（≥5克）表2.上市抽验样品（液体制剂）的最少检验量表3上市抽验样品（固体制剂）的最少检验量注：1.每种培养基各接种10支供试品。2.抗生素粉针剂（≥5克）及抗生素原料药（≥5克）的最少检验数量为6瓶（或支），桶装固体原料的最少检验数量为4个包装。3.如果医用器械体积过大，培养基用量可在2000ml以上，将其完全浸没。①大容量（50-100ml注射剂），取半量检查。②表1，2，3中最少检验量不包括阳性对照试验的用量。薄膜过滤法增加1/2的最小检验数量作阳性对照用；直接接种法增加供试品1支作阳性对照。③采用直接接种法，若每支（瓶）供试品的装量按规定足够接种两份培养基时，则应接种硫乙和马丁培养基。采用薄膜过滤法，其检验量不少于直接接种法的总量，只要供试品特性允许，可将容器内容物全部过滤。阳性对照阴性对照检查法薄膜过滤法直接接种法培养及观察结果判断第三节药品的微生物限度检查2005年版微生物限度标准的应用2005年版微生物限度标准的分类4、含动物组织（包括提取物）的口服给药制剂5、有兼用途径的制剂应符合各给药途径的标准6、霉变、长螨者以不合格论7、原料及辅料参照相应制剂的微生物限度标准执行供试品的抽样及检验取量供试品的保存实验前的准备工作平板菌落计数法供试液的制备（1）供试液的制备（2）供试液的制备（3）供试液的制备（4）供试液的制备气雾剂，将供试品置冰箱（4--8℃）1h，取出，用碘伏棉球（也可用乙醇棉球）擦拭试品开启部位周围，然后以无菌钢锥钻孔并插入容器中，勿移出钢锥，以转动方式使容器抛射剂全部抛出。以无菌注射器吸出全部溶液，按标示量补加稀释剂至足量（若含非水溶性成分，加适量无菌聚山梨酯—80液）此液即为供试品原液。膜剂将药膜剪成碎片，置灭菌锥形瓶中，加入稀释剂至100ml，于45℃±1℃水浴中保温，振摇使溶。茶剂，取供试品10g，置灭菌锥形瓶中，加入稀释剂至100ml，振摇30s,以灭菌纱布过滤，（如为袋泡茶，可直接取2袋，以称样结果按1：10加稀释剂，浸泡30min）。以上供试品如吸水膨胀，或粘度过高，可增加稀释剂，制成1:20—1:100供试液。供试品溶液的制备（5）（含抑菌成分的供试品）供试液的稀释（10倍递增稀释法）注平皿倒培养基摇合倒置培养菌落计数菌落报告原则如有2个相邻稀释级平均菌落数在30—300（30--100）时，则按比值计算。当比值≤2时，则以2个稀释级的平均菌落数均值报告。高稀释级平均菌落数×稀释倍数比值=低稀释级平均菌落数×稀释倍数稀释菌落数平均值10－1大于300（无法计数）10－228026027010－3384039比值＝39000/27000＝1.4小于2报告(27000+39000)/2＝33000如有2个相邻稀释级平均菌落数在30—300（30--100）时，则按比值计算。当比值大于2，小于5时，则以低稀释级的平均菌落数乘以稀释倍数报告。高稀释级平均菌落数×稀释倍数比值=低稀释级平均菌落数×稀释倍数稀释菌落数平均值10－1大于300（无法计数）10－228026027010－38010090比值＝90000/27000＝3.3大于2报告270×100＝27000若比值大于5，或高稀释级的菌落数大于或等于低稀释级的菌落数时，应查明原因，若操作没有问题，说明有抑菌情况，应重新进行方法学验证。如各稀释级平均菌落数均在30以下，则按最低稀释级平均菌落数乘以稀释倍数报告。稀释菌落数平均值报告10－110121111×10＝11010－22310－313如各稀释级的平均菌落数均无菌落生长或最低稀释级平均落数小于1小时，应报告菌数为<1×稀释倍数个/g或ml。实验中的注意事项培养基配制的注意事项操作技术中的注意事项取均匀供试液稀释、注平皿（特别注意研细）