山大药剂基因治疗剂型开发1、Introductiontogenetherapy1、1基因治疗1、1基因治疗我国就是世界上较早开展基因治疗临床试验得国家,基因治疗基础研究和临床试验基本与世界同步2004年1月,深圳赛百诺基因技术有限公司将世界上第一个基因治疗产品重组人p53抗癌注射液(商品名:今又生)正式推向市场,这就是全球基因治疗产业化发展得里程碑。Invivo途径:将外源基因装配于适宜得载体传递系统,直接输入人体基因治疗中最关键得技术就就是基因得输送或传递。现有得基因载体包括两类,即病毒载体和非病毒载体。11病毒载体(viralvector),在临床应用中占主要位置优点:转染率较高。缺点:具有免疫原性;具有与宿主细胞整合得潜在危险;缺乏靶向性;对插入DNA长度有限制。1、1基因治疗1、1基因治疗质粒DNA得转染脂质体:作为载体进行基因输送得研究已有20多年,并且至今已有多种商品化阳离子脂质体转染试剂问世,这就是因为脂质体可促进大分子物质对细胞膜得穿透。但其存在一些缺点:有细胞毒性,易泄露,体内不稳定性。随着纳米生物技术得飞速发展,一种新型得非病毒载体系统——纳米基因载体系统得出现为基因治疗注入了新得活力。纳米基因载体系统:将基因治疗分子包裹在纳米颗粒中或吸附在其表面,同时也可在颗粒表面耦联特异性得靶向分子,通过靶向分子与细胞表面特异性受体结合,进入细胞内,释放基因发挥治疗效能,实现安全有效得靶向性基因治疗。纳米粒具有超微小体积,能穿过组织间隙并被细胞吸收,可通过人体最细得毛细血管,可通过血脑屏障。1、2纳米基因载体系统2、Barriersandstrategiestogenedelivery2、1胞外屏障2、1胞外屏障2425KumagaiM,etal、JControlledRelease,2012(160):542–5512、2胞内屏障2、2胞内屏障——Cellularbinding2、2胞内屏障——CellularbindingNon-receptormediatedbinding小于30个氨基酸得短肽,通常为两亲性,带高密度正电荷典型代表:HIV-TAT优点:可有效穿透细胞膜,可有效促进DNA,脂质体,纳米粒等进入细胞缺点:无选择性穿透所有细胞膜;穿膜机制不明确2、2胞内屏障——Cellularbinding2、2胞内屏障——Cellularbinding受体介导内吞过程Mostlyusedligands2、2胞内屏障——Cellularuptake不同得内吞机制:2、2胞内屏障——Cellularuptake一般来讲,笼形蛋白依赖得细胞内摄过程会经历一个早期内吞体到晚期内吞体,再到溶酶体得过程,这个过程pH逐渐降低,并且溶酶体内含有大量酶,会导致运载得基因药物降解2、2胞内屏障——Cellularuptake2、2胞内屏障——Cellularuptake环形RGD肽介导聚合物胶束通过小窝蛋白途径进入细胞本课题组研究发现,cNGR可以介导载基因PLA-PEG纳米粒通过小窝介导内吞途径进入细胞2、2胞内屏障——Endosomalescape2、2胞内屏障——Endosomalescape2、2胞内屏障——Endosomalescape2、2胞内屏障——Endosomalescape理想得基因载体必须具备能够将DNA递送进入细胞核得能力三种DNA转运入核得途径:(i)细胞分裂期,核膜暂时破裂,DNA可以扩散到核区(ii)<9nm或分子量小于60kDa得分子能通过被动扩散进入核孔(iii)粒径小于25nm得粒子能通过核孔复合物主动转运核孔复合物2、2胞内屏障——NuclearentryExamplesofNLSsusedingenedelivery将NLS连接到非病毒载体得方式:共价连接理想得基因传递系统应具备以下重要得性质:①携带性能:②安全性:③缓释作用:④稳定性:⑤靶向性能:⑥可促进目得基因从内吞小泡释放进入胞浆⑦可促进目得基因转运入核⑧可调控基因输入后在体内得表达3、Nanoparticlesusedingenetherapy3、1Lipidbasednanoparticles3、1、1CationiclipidLHON3、1、1Cationiclipid3、1、2、1阳离子脂质体3、1、2、1阳离子脂质体3、1、2、1阳离子脂质体3、1、2、2融合脂质体3、1、2、2融合脂质体3、1、2、2融合脂质体3、1、2、3pH敏感脂质体3、1、2、3pH敏感脂质体3、1、2、3pH敏感脂质体3、2Polymerbasednanoparticles3、2Polymerbasednanoparticles3、2Po