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课件 基因工程的主要工具.ppt

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第一节DNA重组技术的基本工具基因工程理论上三大突破:(1)DNA是遗传物质——1943美Avery肺炎双球菌的转化实验等。(2)DNA双螺旋结构——1953美Watson英CrickDNA双螺旋模型;1958M.Meselson&F.Stahl用实验证明了半保留复制,不同基因具有相同的物质基础。(3)64个密码子破译和中心法则的确立——1958WatsonandCrick提出中心法则,阐明了遗传信息的流动方向,多肽与基因之间存在对应关系。密码形式——使遗传学在分子水平上得到解释,密码子是通用的技术上三大发明:(1)基因转移载体的发现——1967,T.F.Roth&D.R.Helinski,发现质粒的自我复制能力,并能够在细菌之间转移。基因是可以转移的。(2)工具酶的发明——1972H.C.Smith、W.Arber&D.Nathans从流感嗜血杆菌中分离得到限制性内切酶;1970年,逆转录酶的发现使真核细胞的基因制备成为可能;此后,多种限制酶和连接酶发现。基因是可切割的。(3)DNA体外重组的实现——1972年,美Berg第一次构建出了体外重组DNA分子。重组DNA表达实验的成功——1973,H.Boyer&S.Cohen选用仅含单一EcoRI酶切位点的载体质粒pSC101,使之与非洲爪蟾核糖体蛋白基因的DNA片段重组。重组的DNA转入大肠杆菌DNA中,转录出相应的mRNA。基因工程诞生元年基因工程DNA重组技术的基本工具BamHⅠ限制性内切酶及其缓冲液二、DNA连接酶三、载体2、载体的选择标准(具备的条件):能在宿主细胞中自主复制并稳定保存;有多个限制酶切位点;具有标记基因,便于筛选;(如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等)重组DNA表达实验的成功
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