GUS基因检测仪器设备：恒温箱、超净工作台器具：1.5ml的塑料管、镊子、解剖刀等材料：转化的愈伤组织试剂及其配制：50mmol/l的磷酸钠缓冲液（pH7.0）：A液：取NaH2PO4.2H2O3.12g溶于蒸馏水，定溶至100ml。B液：取Na2HPO4.12H2O7.17g溶于蒸馏水，定溶100ml。取A液39ml与B液61ml混合，定容至400ml，调PH至7.0。50mmol/L铁氰化钾母液：称3.295g，用蒸馏水定容至200ml50mmol/l亚铁氰化钾母液：称4.224g，用蒸馏水定容至200ml。0.5mol/lEDTA母液（pH8.0）：药品分子量100ml500mlEDTANa22H2O372.2418.6g93.06g双蒸H2O80ml400ml用NaOH调PH至8.06g10gDdH2O定容至100ml500mlGUS检测液的配制：甲醇、Gluc、DMF100mgGluc，先溶于1ml的DMF。取80ml50mmol/l的磷酸钠缓冲液（pH7.0），加入1ml50mmol/L铁氰化钾、1ml50mmol/L亚铁氰化钾和2ml0.5mol/lEDTA（PH8.0），再加入已溶解的Gluc，再加20ml的甲醇，混匀。（配制方法参考《现代植物生理学实验指南》p348）将配好的GUS检测液分装于1.5ml的塑料管中（1ml/管，1组1管），－20°C保存备用。GUS就是β-葡糖苷酸酶(β-glucuronidase），遇到其底物X-GLUC（5-溴-4氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷），在酶活性部位产生蓝色沉淀。我看了你的帖子很胡涂，不知道你是不是搞错了。5-溴-4氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷是IPTG，在它的诱导下，会产生β-glucuronidase，它和X-gal形成互补，兰色。组织化学法检测报道基因GUS的表达共培养后愈伤的瞬时表达、抗性愈伤的鉴定以及转基因植株的鉴定用GUS组织化学法测定.将待测定的材料,如愈伤或叶片,浸入适量X-Gluc溶液,于37℃保温过夜后,在体视显微镜下观察,拍照记录.若将加有X-Gluc溶液的材料抽真空,染色效果将更好.如材料存在色素干扰问题,染色后用酒精脱色,使色素的颜色褪掉而使染成的蓝色保存.X-Gluc染色液：0.2mol/LNa3PO4缓冲液(62mL0.2mol/LNa2HPO4;38mL0.2mol/LNaH2PO4)，pH7.0；0.1mol/LK3［Fe(CN)6］;0.1mol/LK4［Fe(CN)6］.3H2O;1.0mol/LNa2EPTA;0.1%X-Gluc.Assayingchimericgenesinplants:theGUSgenefusionsystem什么是GUS基因gus基因就是转β-葡糖醛酸酶基因该基因产物为GUS蛋白质，相当稳定而不易降解，并为一水解酵素，有简易的测定方法；且可使用市售的基质(substrate)在原位(insitu)显现出酵素的活性，以肉眼即可检测其产物，非常方便。农杆菌菌株及质粒根癌农杆菌(Agrobacteri-umtumefaciens)菌株LBA4404/pCAMBIA1301由大连理工大学安利佳教授提供。载体pCAMBIA130的T-DNA区含有潮霉素抗性(HYG)基因和β-葡萄糖苷酸酶(GUS)基因,在GUS基因编码区内有一内含子,因此GUS基因只能在植物中表达而不能在细菌中表达(图1)。GUS染色液配制：100mmol/LmM磷酸钠缓冲液（pH=7.0），内含0.5mg/mlX-GluC、1%TritonX-100、1%DMSO和10mmol/LmMEDTA。用于木麻黄转基因GUS检测方法一、检测液的配制：序号成分每配10ml每配20ml每配50ml1X-Gluc5mg10mg25mg2DMF(dimethylformamide)50μl100μl250μl30.5mol/LEDTApH820μl40μl100μl4TritonX-10050μl100μl250μl550mMNaPO4pH7用其定容用其定容用其定容*650mMK-ferricya100μl200μl500μl*750mMK-ferrocya100μl200μl500μl说明：*一般不用，仅用来针对增强启动子。保存：铝膜封好-20℃保存。1号，为固体2号，为液体3号，需配制药品分子量10ml100ml500mlEDTANa22H2O372.241.86g18.6g93.06g双蒸H2O8ml80ml400mlDdH2O定容至10ml100ml500mlNaOH调PH8.04号，为液体5号，需配制A液：取Na