凋亡(diāowánɡ)(apoptosis)：机体在正常生理或病理状态下发生的一种自发的、程序化的死亡过程。坏死（Necrosis）：各种致病因子，干扰和中和了细胞的正常代谢活动，造成细胞的意外死亡。二、细胞(xìbāo)坏死与凋亡的比较三、细胞凋亡(diāowánɡ)的生理意义NormalCell（二）、生化(shēnɡhuà)改变内源性核酸(hésuān)内切酶的作用五、细胞(xìbāo)凋亡的检测方法透射电镜观察(guānchá)荧光(yíngguāng)显微镜2、DNA片断(piànduàn)化检测/3、流式细胞仪检测(jiǎncè)flowcytometer（一）PI单染判断：在直方图上，Go/G1期前有一个亚二倍体峰。（检测(jiǎncè)晚期凋亡，但不能判断是晚期凋亡还是坏死）（二）Annexinⅴ/PI双染色(rǎnsè)检测标准(biāozhǔn)：早期凋亡细胞：Annexinⅴ-FITC(+)；PI(-)；坏死细胞和晚期凋亡继发性坏死细胞：Annexinⅴ-FITC(+)；PI(+)；机械性坏死及非特异性染色：Annexinⅴ-FITC(-)；PI(+)；正常细胞：Annexinⅴ-FITC(-)；PI(-)；C-mycASO200nmol/L4、线粒体膜势能(shìnéng)的检测亲脂性阳离子荧光探针JC-1以单体形式(xíngshì)存在，可发出绿色荧光（527nm），若以多聚体形式(xíngshì)存在，可发出红色荧光（590nm）.JC-1可透过正常细胞膜以单体状态进入胞内，正常健康线粒体的膜电位（△ψ）具有极性，JC-1依赖于△ψ的极性被迅速摄入线粒体内，并形成多聚体，发出红色荧光（590nm，线粒体）和绿色荧光（527nm，胞液）.而细胞发生凋亡时，线粒体跨膜电位被去极化，JC-1从线粒体内释放，线粒体内红光强度减弱（590nm），以单体的形式(xíngshì)存在于胞液内而发绿色荧光（527nm）.因此在双色滤光片下观察，正常细胞为高绿高红，凋亡细胞为高绿低红.正常(zhèngcháng)细胞为高绿高红，5、Caspase-3活性的检测(jiǎncè)Westernblot分析(fēnxī)caspase-3的活化Caspase3，6，7原理：活化的Caspase-3能够特异(tèyì)切割D1E2V3D4-X底物，水解D4-X肽键。根据这一特点，设计出荧光物质偶联的短肽Ac-DEVD-AMC。在共价偶联时，AMC不能被激发荧光，短肽被水解后释放出AMC，自由的AMC才能被激发发射荧光。根据释放的AMC荧光强度的大小，可以测定caspase-3的活性，从而反映Caspase-3被活化的程度。谢谢(xièxie)！感谢您的观看(guānkàn)！