实验一柱色谱分离技术——邻硝基苯胺和对硝基苯胺的分离【目的与要求】练习薄层色谱及柱色谱分离技术【所需试剂】硅胶板；硅胶；邻硝基苯胺和对硝基苯胺混合物（0.55g对硝基苯胺和0.7g邻硝基苯胺溶于100mL石油醚中）；乙酸乙酯；石油醚【操作步骤】1、邻硝基苯胺和对硝基苯胺的薄层分离取已经准备好的硅胶板一块，用管口平整的毛细管[1]插入样品液中，在距离板一端1cm处轻轻点样[2]。每块板点样三个，分别点样邻硝基苯胺、对硝基苯胺及未知混合物[3]。如下图：在层析杯内倒入少许展开剂，高度应为0.5cm左右，盖好层析杯，稍加摇振，使层析杯内被溶剂蒸气饱和。将点好样的薄层板放入层析杯内，点样一端在下，浸入展开剂内约0.5cm[4]，盖好杯子。待溶剂前沿距板的上端0.5cm时，立即取出薄层板，用铅笔记下溶剂前沿位置，晾干。展开剂是石油醚及乙酸乙酯的混合物，其比例同学自己确定。几个同学一组，按不同的体积比展开，确定柱层析时的洗脱剂。建议采用以下比例：石油醚：乙酸乙酯（体积比）1：1；3：2；2：1；5：22、邻硝基苯胺和对硝基苯胺的柱色谱层分离取色谱柱一根，垂直装置，以锥形瓶作洗脱剂的接收器。先将溶剂倒入柱内约柱高的3/4，然后再将一定量的吸附剂和溶剂调成糊状，从柱的上面倒入柱内，同时打开柱下活塞，控制流速每秒一滴，用木棒或套有橡皮的玻璃棒轻轻敲打柱身，使吸附剂慢慢而均匀地下沉[5]，在整个操作过程中，柱内的液面始终要高出吸附剂[6]。当溶剂的液面恰好降至硅胶的表面上时，立即用滴管沿柱壁加入3ml邻硝基苯胺和对硝基苯胺的混合液。当溶液液面降至氧化铝表面时，用滴管滴入溶剂洗去粘附在柱壁上的混合物。然后用按照根据薄层色谱确定的洗脱剂淋洗，观察色带的形成和分离。当黄色邻硝基苯胺色层到达柱底时，更换接收器，收集此色带。然后可适当加大乙酸乙酯的比例，收集淡黄色对硝基苯胺色带。将收集的邻硝基苯胺和对硝基苯胺分别在旋转蒸发器上蒸取溶剂，冷却结晶。干燥后测熔点。邻硝基苯胺71—71.5℃，对硝基苯胺147—148℃。【注释】[1]点样用的毛细管必须专用，不得弄混。[2]点样时，毛细管尖刚好触及板面即可，点样过重会使薄层破坏。[3]点样时各点之间的距离及样品点与薄层板一端的距离约1cm左右。[4]展开剂一定要在点样线下，不能超过。[5]色谱柱紧密与否，对分离效果有影响。若柱中留有气泡或各部分松紧不匀，会影响渗透速度和显色的均匀。更不能出现断层或暗沟。[6]为了保持色谱柱的均一性，应使整个吸附剂浸泡在溶剂中，否则当柱中的溶剂流干时，会使柱身干裂，影响渗透和显色的专一性。实验二苯甲酸的制备【目的与要求】1）练习回流、抽滤等基本操作；2）练习重结晶；【反应式】【所需试剂】甲苯2.7mL(2.3g，0.025mol)；高锰酸钾8.5g(0.054mol)；浓盐酸。【操作步骤】在装有回流冷凝管的250ml三口瓶中放入2.7ml甲苯和100ml水，在磁力搅拌下，加热回流至沸。从回流冷凝管上口分批加入8.5g高锰酸钾（最后可用25ml水冲洗粘在管壁的固体）。继续搅拌煮沸直到甲苯层几乎近于消失，回流液不再出现油珠。将反应混合物趁热减压过滤[1]，用少量热水洗涤滤渣二氧化锰。合并滤液和洗涤液，在冰水浴中冷却，用浓盐酸酸化，至苯甲酸全部析出（用pH试纸检验）。将析出的苯甲酸减压过滤，用少量冷水洗涤，挤压抽干。在水中进行重结晶，可得到纯净的苯甲酸。【注释】[1]如果滤液呈紫色，可加入少量亚硫酸氢钠使紫色褪去，重新减压过滤。[2]苯甲酸在水中的溶解度如下：t/℃1830607075溶解度/g.(100mL)-10.270.421.21.782.2【思考题】反应完毕后，如果滤液呈紫色，为什么要加亚硫酸氢钠？精制苯甲酸还有什么方法？实验三香豆素-3-羧酸的合成【目的及要求】1）了解Knovengel反应；2）练习回流、重结晶等操作；【反应式】【所需试剂】水杨醛4.2mL(5g，0.014mol)；丙二酸乙酯6.8mL(7.2g，0.0456mol)；无水乙醇，六氢吡啶；冰醋酸；氢氧化钠；95%乙醇；浓盐酸、无水氯化钙。【操作步骤】1、香豆素-3-甲酸乙酯的反应在干燥的100ml圆底烧瓶中加入4.2mL水杨醛，6.2g丙二酸乙酯、25mL无水乙醇，0.5mL六氢吡啶和2滴冰醋酸，装上回流冷凝管，冷凝管上口接一个氯化钙干燥管，磁力搅拌小火加热回流2h。稍冷后将反应物转移到锥形瓶中，加入30mL水，置于冰浴中冷却。待结晶完全后，过滤，晶体每次用2-3mL50%冰冷过的乙醇洗涤2-3次。粗产物为白色晶体，经干燥后重约6-7g，熔点